液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)高效。
液相色譜儀的組成:
1、輸液系統
包括溶劑柜、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等,其中核心部分是泵;泵的作用提供足夠的驅動(dòng)力使流動(dòng)相通過(guò)填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種:
?。?)等度洗脫:在同一分析周期內流動(dòng)相組成保持恒定,適合于組分數目較少,性質(zhì)差別不大的樣品。
?。?)梯度洗脫:采用兩種(或多種)不同極性的溶劑,在分離過(guò)程中按一定程序連續改變流動(dòng)相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分數目多、性質(zhì)差異較大的復雜樣品。
2、進(jìn)樣系統
把分析試樣有效地送入色譜柱進(jìn)行分離。一般有自動(dòng)進(jìn)樣器和手動(dòng)進(jìn)樣器,進(jìn)樣量應不小于定量環(huán)體積的5-10倍(最少3倍)。
3、分離系統
主要是色譜柱,色譜柱是一根裝滿(mǎn)填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等,其尺寸(內徑、長(cháng)短)不盡相同;色譜柱填料主要有硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì),填料的粒徑不盡相同。
4、檢測器
對檢測器的要求:靈敏度高、重現性好、線(xiàn)性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。
結構特點(diǎn):
1、液相色譜儀是以液體作為流動(dòng)相的色譜分離方法;
2、流動(dòng)相具有運載樣品分子和選擇性分離的雙重作用;
3、適用于高沸點(diǎn)、大分子、強極性和熱穩定性差的大分子化合物(常溫進(jìn)樣不破壞藥